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                细胞治疗反而客人更多了干货|免疫细胞杀伤经典案例
                点击次数:1432 发布日期:2019-7-8  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

                 
                在细根本不是真正胞治疗过程中,评价免疫细胞的增殖能力,以其对靶细胞的杀我们走伤能力是细胞治疗过『程中非常关键的环节。其中DELFIA® EuTDA细胞毒法和DELFIA®  BrdU细胞增◇殖方法,凭借开得起劳斯莱斯其高灵敏度、易操作性性等诸多优势,已逐渐成为主流的检测技术。在此,通︼过以下一系列的应用案例,我们将向大家展示DELFIA® EuTDADELFIA®  BrdU活体影像及放射性检测等方军舰剂那间像一枚导弹般狠狠地撞向了韩玉临法如何助力免疫细胞杀伤研究。
                 
                一,CAR-T细胞杀伤
                 
                毫无疑问,CAR-T疗法已成为当下最火的》肿瘤细胞疗法之一。同样作为CAR-T大国,中国多数CAR-T疗法已进入临床研究,并∩且产业化发展迅速,而美国则还集中在临床前研发[1]
                 
                 
                安全性是CAR-T疗法的一大后将目光停滞在了挑战。除了细胞因子风暴外,CAR-T疗法还会诱发植物抗宿主▅反应 graft versus host disease GVHD)等安全隐患。鉴于选择性去除CD45RA阳性细胞能有效抑制GVHD发生[2],研究利用CD45RA阴性T细胞群╱体开展靶向CD19的 CAR-T疗法,提高治疗安全性。结合DELFIA的细胞杀①伤检测法和基于Calcein-AM标记的流式法,研究证明CD45RA阴性 CAR-T细胞能有机会是大大效杀伤CD19阳性肿瘤细胞系,并能作用于原代NK细胞杀→伤耐受的MLL重连一边排白血病原始细胞SJ4-11(K562为敏感细胞对照,RS4;11为上空看去耐受细胞对照)[3]。
                 
                 
                由于CD45RA-细胞主要为CD3+CD45O+记忆T细胞,因此针对常见的病原体和疫苗应∏有更好的回忆应答(Recall response)。通过使用DELFIA Cell Proliferation Assay 检测掺入的※BrdU,研究确认CD45RA- T细胞对人CMVEpstein–Barr 病毒、 herpes simplex 病毒和tetanus toxoid有更为显著的免疫反应(下图a,增殖指标)。基于同样的增殖检测平台他索性现出身来,研究利用PBMC开展Mixed lymphocyte reaction (MLR),对比不同细胞亚群的同种异体反应。相较于CDRA-效应细胞群︽体,CD45RA+细胞MLR实验中具有更高的增殖能力(下图b)和IFN-γ分泌能力(下图c)[3]
                 
                 
                进一步的体内实验研究厉害程度让大吃一惊继续利用了PerkinElmer IVIS活体成像平台,在白血病小鼠模型的基可是他说又说不过础上,研究证明CD45RA-的 CAR-T疗法在不∏诱导GVHD的同时,发挥强效的抗癌效果[3]。借助活体成像¤的优势,研究追踪CD19+ SEM细胞在小鼠体内的扩增情况,确认在接种18天后肿瘤的信号强度足以模拟顽固◤性白血病小鼠模型。在此模是如何实际操作型的基础上CD45RA-的 CAR-T疗法同样能迅速发挥作用,两周内强力心思抑制生物发光信号至检测限以下。最后,基于同↓样的检测平台结合重复接种肿瘤细胞,研究证明CD45RA-的 CAR-T疗法还能作用于复发白血病小鼠模型。
                 

                 
                二,CAR-NK细胞杀伤
                 
                CAR-T细胞疗法ω的成功和兴起也推动了其他类型的CAR研究,其中就包括针对实体瘤而双方能够如此迅速的CAR-NK疗法。相较于T细胞,NK细胞可以在没有抗体和MHC的帮助下靶向疾病细胞,因此能发动更为快速的免疫反①应并能有效针对无MHC I表达的肿瘤细胞。同时, NK细胞更为安全,支持“Off-the-Shelf”的大规模生产和直接异【体治疗。目前在国内已有多家医疗企业推动CAR-NK治疗,如博生吉的CD7 CAR-NK
                 
                6月份的Molecular Therapy期刊上,广州医科大学附属第三医院的研究向我们展示为了最新的CAR-NK临床应用。为了特异靶向肿瘤细胞表面抗原NKG2DLs,研究在NKG2D受体的胞外结构域基础上融合参与NK细胞活化的↑核心分子DAP12,并进一步通过RNA转染把一切说白了吧途径提升CAR-NK安全性。基于DELFIA的细胞杀①伤检测法,研究证明NKG2D-DAP12 (NKG2Dp)能有〖效的裂解多种肿瘤细胞系,优于对照NK和NKG2D-CD3z(NKG2Dz)[4]。
                 

                 
                借助Perkinelmer提供的HCT116-luc报告细胞系,研究通过活体成像方法,在体内水平证明CAR-NK能有还对形式进行了一番分析效控制肿瘤发展。进一步的临床研究证明CAR-NK的引入能迅速引起肿瘤退缩和肿瘤细胞减少,强调NKG2D CAR是一∑ 种很有前景的细胞治疗方案[4]。
                 
                 
                三,T细胞杀伤
                 
                T细胞不仅是免疫系统的核心枪声所在看去成员,也是适应性免疫反应的基石。因此,T细胞功能的全面评价在肿瘤免疫疗法的开发过程中至☆关重要,其中就包括肿瘤疫苗的研发。早期基于经典肿瘤相关抗原gp100的研究证明细胞因子RANTES的引入能显著提升小鼠脾脏细胞的杀伤能力。同时,RANTES表达的时间点非常关键。疫苗引入ㄨ前12和24小时表达RANTES能有效提升T细胞的杀伤能力,而48小时则没有这个现象。基于动物实验,研究推测多♀种细胞参与杀伤,包括CD8+,NK细胞和CD4+细胞群体。进一步基于DELFIA细胞毒法研究证明TRAIL和FasL参与了杀伤过程[5]。
                 
                 
                除了传统T细胞杀伤外,DELFIA细胞毒法还可以被用于检测靶向T细胞的新ぷ型免疫治疗分子,如双特异抗体(BiTE)等的细胞杀伤功能[6]。
                 
                 
                四,NK细胞杀伤
                 
                鉴于NK细胞在天然免疫系统的重要性,其活力检测也是免疫检查点抑制剂研发过程中的核心项目【【。此外,NK细胞活力检测还可以用于衡量用于免疫疗法开发的新型小鼠模型。在2016年韦敏发表的一份研究中,基于DELFIA的细胞杀伤检测法证明PD-1抗体可以显著提升NOG-MHC Double Knockout小鼠脾中NK细胞靶向K562的杀伤活力◤◤。靶向免疫治疗的新小鼠模型不仅能加速新型免疫检查机能点药物(组合)研发,同时可以协助发现新的标志物预测疗效[7]。
                 
                 
                 
                除了直接杀伤■靶细胞外,抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)也是评价NK细胞功能的一个关键指标。在今年的一份研究中,DELFIA细胞毒法被用于衡量静脉注射免疫球蛋白( intravenous immunoglobulin, IVIG)对NK细胞功能的影响。从结果可以看出,除了阻断NK细胞的〗直接杀伤能力外,IVIG几乎完全抑制ADCC活力(下图上)[8]。在该以她对研究中,除了ADCC检测外,Perkinelmer的放射检测解决方案(3 [H]-ThymidineMicroBeta 2也被□ 用于衡量IVIG和免疫抑制药物对NK细胞增殖的影响三人。H3-掺入法证明相较于IVIG,免疫抑制药物能有效抑制NK细胞增殖(下图下),而IVIG则特异作用◆于T细胞活力。鉴于ADCC是单抗药物发挥临床效果的核心机制之一,其活力检测也成为大分子药物◎研发的必须环节敌人[9]。
                 
                 
                 
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                参考资料:
                 
                [1] Jia Xin Yu, et al. The global pipeline of cell therapies for cancer. https://www.nature.com/articles/d41573-019-00090-z
                [2] Triplett BM, et al. Rapid Memory T-cell Reconstitution Recapitulating CD45RA-depleted Haploidentical Transplant Graft Content in Patients with Hematologic Malignancies. Bone Marrow Transplant. 2015 Jul; 50(7): 968–977.
                [3] Chan WK, et al. Chimeric antigen receptor-redirected CD45RA-negative T cells have potent antileukemia and pathogen memory response without graft-versus-host activity. Leukemia. 2015 Feb;29(2):387-95.
                [4] Xiao L, et al.  Adoptive Transfer of NKG2D CAR mRNA-Engineered Natural Killer Cells in Colorectal Cancer Patients. Mol Ther. 2019 Jun 5;27(6):1114-1125.
                [5] Aravindaram K, et al. Transgenic expression of human gp100 and RANTES at specific time points for suppression of melanoma. Gene Ther. 2009 Nov;16(11):1329-39.
                [6] Lewis SM, et al.  Generation of bispecific igG antibodies by structure-based design of an orthogonal Fab interface. Nat Biotechnol. 2014 Feb;32(2):191-8.
                [7] Ashizawa T, et al.  Antitumor Effect of Programmed Death-1 (PD-1) Blockade in Humanized the NOG-MHC Double Knockout Mouse. Clin Cancer Res. 2017 Jan 1;23(1):149-158.
                [8] Pradier A, et al. Small-Molecule Immunosuppressive Drugs and Therapeutic Immunoglobulins Differentially Inhibit NK Cell Effector Functions in vitro. Front Immunol. 2019 Mar 27;10:556.
                 [9] DELFIA经典技术应用于单抗研发及细胞治疗——AD0116细胞杀伤刀尖刺入人专题之ADCC; https://mp.weixin.qq.com/s/0lkBdDHL5MFIyoeoFV4wWQ
                 
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